动物模型构建与评估丨大鼠创伤性脑损伤模型

发布时间：2025-04-05 01:42:04 来源：一线新闻网 作者：夜风

《动物模型构建与行为评估》电子版pdf，网盘发货创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）是通过控制皮层冲击（Rodent controlled cortical impact injury，CCI）模型诱导的。8周龄雄性SD大鼠，首先将大鼠称重后麻醉，麻醉后以俯卧位固定在手术垫上，用剃须刀片剃除大鼠头顶部毛发，暴露头皮，用手术刀作头顶皮肤正中切口，暴露颅骨、表面筋膜和软组织。使用40%双氧水缓慢轻柔地溶解掉颅骨表面软组织。使用直径0.4cm钻头在颅左侧以中线旁2.5mm，前囟后1.5mm为中心磨开一直径为5mm的骨窗，同时保留硬脑膜。随后，将大鼠固定在TBI建模装置上，设置如下参数：冲击深度3.5mm，速度5m/s，接触时间500ms。撞击后，将大鼠从装置中取出，用棉签短暂压迫止血，清理手术野，间断缝合切口。对于Sham组，仅开放颅窗而不进行TBI操作。整个操作过程中尽量避免出血和对周围组织的刺激。所有大鼠处理完毕后放置于加热垫上待其自然苏醒。神经系统功能缺损评估改良神经功能评分（Mahmood’s method neurological severity score，mNSS）改良神经功能评分（mNSS）是一种用于评估实验动物（特别是啮齿类动物，如大鼠和小鼠）神经功能缺损程度的综合评分系统。能够全面地考量动物在运动、感觉和反射等多个方面的神经功能表现，在研究脑损伤（如脑卒中、脑外伤等）、神经退行性疾病以及神经保护药物筛选等实验中被广泛应用。运动功能（总分4分）正常运动（0分）：动物能够正常行走、奔跑，四肢运动协调，无任何异常步态或肢体无力的表现。例如，小鼠或大鼠在开阔场地内能够自由、快速地移动，四肢动作流畅，没有拖曳肢体、摇晃或跌倒等情况。轻度运动障碍（1分）：动物行走时表现出轻微的步态异常，如轻微的肢体不协调或行走时稍显不稳，但仍能够自主行走并保持身体平衡。可能会出现轻微的肢体拖曳，但不影响正常活动。中度运动障碍（2分）：动物行走困难，有明显的步态不稳，肢体协调性差。可能会频繁出现肢体拖曳，甚至偶尔会跌倒，但在辅助下（如轻推）能够继续行走。重度运动障碍（3分）：动物几乎不能自主行走，肢体活动严重受限，大部分时间处于卧倒状态，只有在强烈刺激下（如疼痛刺激）才能引起肢体微弱的活动。肢体瘫痪（4分）：动物完全丧失肢体运动能力，对任何刺激均无肢体运动反应。感觉功能（总分3分）正常感觉（0分）：动物对触觉、痛觉和本体感觉等刺激的反应正常。例如，用棉棒轻触动物的肢体、身体等部位，动物能够迅速做出反应，如躲避、转头等；对轻微的针刺（使用合适的针具，控制针刺深度和力度）能产生正常的痛觉反应，如缩肢、鸣叫等；在放置于倾斜平面或抬起四肢等操作时，动物能通过本体感觉维持身体平衡。轻度感觉障碍（1分）：动物对触觉、痛觉或本体感觉的反应稍迟钝。如棉棒轻触时反应延迟，针刺引起的痛觉反应较正常减弱，在倾斜平面上维持平衡的能力稍差，但仍能察觉到刺激并做出一定反应。中度感觉障碍（2分）：动物对感觉刺激的反应明显迟钝。需要较强的触觉刺激（如用力按压）才能引起反应，痛觉反应明显减弱，在倾斜平面上很难维持平衡，本体感觉明显受损。重度感觉障碍（3分）：动物几乎对触觉、痛觉和本体感觉刺激无反应，仅在非常强烈的刺激下可能出现微弱反应或无反应。反射功能（总分3分）正常反射（0分）：包括角膜反射、耳反射、翻正反射等生理反射正常。例如，用细棉丝轻触角膜时，动物会迅速眨眼；在耳部受到轻微声音或气流刺激时，动物会有耳部抖动等反应；将动物从空中倒置后，动物能够迅速翻转身体恢复正常姿势。轻度反射减弱（1分）：部分反射减弱。如角膜反射或耳反射稍有延迟，翻正反射稍慢，但仍能完成反射动作。中度反射减弱（2分）：反射明显减弱。需要较强的刺激才能引出反射，且反射动作不完整或延迟明显。例如，角膜反射可能只有轻微的眼球转动，翻正反射可能需要较长时间才能完成。重度反射减弱或消失（3分）：大部分反射消失，即使给予强烈刺激也很难引出反射动作。评分范围及意义：mNSS总分为0-10分，分数越高表示神经功能缺损越严重。0-3分：一般认为神经功能基本正常或仅有轻微缺损，动物的日常生活活动（如进食、饮水、自主活动等）基本不受影响。4-6分：提示中度神经功能缺损，动物可能出现明显的运动、感觉或反射异常，对正常生活活动有一定影响，如活动范围减小、进食稍有困难等。7-10分：表示重度神经功能缺损，动物的生存质量严重下降，可能需要特殊护理，如无法自主进食、饮水，活动能力极度受限等。抓力测试：进行抓力实验时将大鼠放置在抓力板上，向后牵拉鼠尾，待动物抓牢后，均匀用力向后拉，使动物松爪。此时记录仪会记录下动物的最大抓力。依次检测左右抓力并记录。每只大鼠测试5次以上，待抓力读数稳定在某一数值上下波动时记录5个读数。新物体识别实验评估大鼠情景记忆能力：新物体识别实验（Novel Object Recognition Test）主要基于大鼠对新奇事物的探索天性来评估其情景记忆。大鼠在熟悉环境中的物体后，经过一定时间间隔，对新出现物体的探索时间会相对较长。这种对新物体的偏好反映了大鼠对之前接触物体情景的记忆，从而可以用于评估其情景记忆能力。一个方形的、大小合适的实验箱，一般为40-60cm长、40-60cm宽、30-50cm高，材料可以是有机玻璃或塑料，以方便观察大鼠行为。实验箱放置在安静、光线均匀的环境中，避免外界干扰。准备三个不同形状、大小和材质的物体，如塑料玩具、金属小摆件等。物体的大小要适中，以保证大鼠能够方便地探索，同时避免物体过大影响大鼠在实验箱内的活动。这些物体表面应该是无毒、无异味的，并且易于清洁。将大鼠放入空的实验箱中，让其自由探索10-15分钟，使大鼠熟悉实验箱环境。这一步是为了减少大鼠对新环境的好奇和紧张情绪，以便后续更好地观察其对物体的探索行为。在实验箱内放置两个相同的物体（A和A'），将大鼠放入实验箱中，让其自由探索这两个物体10-15分钟。观察并记录大鼠对每个物体的探索时间。探索行为可以定义为大鼠用鼻子嗅闻物体、用爪子触碰物体、围绕物体转圈等行为，当大鼠的鼻尖距离物体在2-3cm以内或者直接接触物体时，就认为大鼠在探索该物体。将实验箱中的一个熟悉物体（如A'）换成一个新物体（B），把大鼠再次放入实验箱，观察并记录大鼠在5-10分钟内对新物体（B）和熟悉物体（A）的探索时间。记录大鼠在训练阶段对两个相同物体的探索时间（T1和T1'），以及在测试阶段对新物体和熟悉物体的探索时间（T2和T2'）。计算辨别指数（Discrimination Index，DI）来评估大鼠的情景记忆能力。计算公式为：DI=(T2-T2')/(T2+T2')。如果DI>0，说明大鼠对新物体有偏好，即能够区分新物体和熟悉物体，反映其具有情景记忆能力；如果DI=0，表明大鼠对新物体和熟悉物体的探索时间相同，可能没有情景记忆；如果DI<0，这是一种异常情况，可能是由于实验误差或者大鼠的异常行为导致。Morris水迷宫实验：该测试通常用于评估大鼠的空间学习和工作记忆能力。水迷宫由水池、摄像头及计算机分析系统组成。池壁周边3处放置光源，用遮光帘隔开外界，将水池分为SE、SW、NS、NW4个象限，池壁上贴3个形状不同的提示物。适应时不放置平台，将鼠头朝壁轻轻放入水中，60s后捞出并擦干放归鼠笼。实验第1~5天为训练，每天在同一时间，第3象限固定平台，将每只大鼠依次从不同的象限放入，让其在60s内寻找平台，如60s后仍未找到平台，则将其引导至平台，后捞出擦干。每天进行4次训练重复，每只大鼠训练间隔30min以上。第6天进行测试，移去平台，将大鼠从第1象限放入水中，记录其在60s内活动情况。ANY maze系统自动记录并计算大鼠逃避潜伏期、学习期轨迹和实验期在第3象限呆的时间和穿越平台的次数等实验数据。参考文献：1、Israelsson C，Bengtsson H，Kylberg A，et al. Distinct cellular pat⁃ terns of upregulated chemokine expression supporting a prominent in⁃ flammatory role in traumatic brain injury[J]. J Neurotrauma，2008，25 （8）：959-974.2、Chen T，Liu WB，Chao XD，et al. Salvianolic acid B attenuates brain damage and inflammation after traumatic brain injury in mice[J]. Brain Res Bull，2011，84（2）：163-168.3、Mahmood A，Lu DY，Wang L，et al. Treatment of traumatic brain injury in female rats with intravenous administration of bone marrow stromal cells[J]. Neurosurgery，2001，49（5）：1196-1204.4、Wang ZY，Wang ZY，Wang AQ，et al. The neuroprotective mecha⁃ nism of sevoflurane in rats with traumatic brain injury via FGF2[J]. J Neuroinflammation，2022，19（1）：51.5、朱林,夏雷,袁浩,等.抑制AMPARs内吞可改善创伤性脑损伤大鼠的运动和认知功能[J].重庆医科大学学报,2024,49(11):1377-1384.DOI:10.13406/j.cnki.cyxb.003617.6、Yu YZ，Huang ZL，Dai CF，et al. Facilitated AMPAR endocytosis causally contributes to the maternal sleep deprivation-induced impair⁃ ments of synaptic plasticity and cognition in the offspring rats[J]. Neuro⁃ pharmacology，2018，133：155-162.动物行为实验相关方法电子版pdf推荐，网盘发货找实验方法，上脑声常谈动物模型构建与行为评估交流群扫码邀请入群方法检索教程往期实验方法，需要的老师可以按照以下操作进行查阅：进入公众号脑声常谈→底部菜单栏脑声助手方法检索→最上方搜索框输入实验名称，您找的实验方法就出来啦！

特别声明：以上内容(如有图片或视频亦包括在内)为自媒体平台“号”用户上传并发布，本平台仅提供信息存储服务。

相关文章